人源細(xì)胞STR鑒定服務(wù)

使用說明書

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

第1版（2016年04月修訂）

背景介紹　　

STR（Short Tandem Repeat，短串聯(lián)重復(fù)序列），是一類廣泛存在于真核生物基因組中的DNA串聯(lián)重復(fù)序列，基因位點(diǎn)由長度為3-7個堿基對的短串連重復(fù)序列組成，這些重復(fù)序列廣泛存在于人類基因組中，可作為高度多態(tài)性標(biāo)記，由于其核心序列重復(fù)次數(shù)存在個體差異多態(tài)性，被稱為細(xì)胞的DNA指紋，其可通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來檢測。目前STR檢測已被廣泛應(yīng)用于親子鑒定、個體識別、細(xì)胞來源判定等方面。ATCC、DSMZ、JCRB等國際知名細(xì)胞庫已將STR基因分型列為細(xì)胞鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)。 　　

STR基因座位上的等位基因可通過擴(kuò)增區(qū)域內(nèi)重復(fù)序列的拷貝數(shù)的不同來區(qū)分，在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測來識別。隨后通過一定的計(jì)算方法，即可根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與專業(yè)的細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫比對從而推算出樣品所屬的細(xì)胞系或可能的交叉污染的細(xì)胞系名稱。

服務(wù)項(xiàng)目 　　

提供人源細(xì)胞21個基因座檢測，所選用的基因座不僅包含ATCC、DSMZ和JCRB細(xì)胞庫中的基因座，更添加12個高度多態(tài)性位點(diǎn)，具有極高的準(zhǔn)確性。 　　

細(xì)胞鑒定標(biāo)準(zhǔn)符合美國2011年《ANSI/ATCC ASN-0002-2011》以及2020年版《中華人民共和國藥典：四部》要求。

檢測方法

用Ezup 柱式基因組抽提試劑盒提取 DNA，采用 21 ID system擴(kuò)增20個STR位點(diǎn)和性別鑒定位點(diǎn)，使用Seqstudio遺傳分析儀(Applied Biosystems)對PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測，使用GeneMapper6.0 軟件(Applied Biosystems)對檢測結(jié)果進(jìn)行分析，并與ExPASy數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。

人類鑒定基因座　

AMEL，D3S1358，D13S317，D7S820，D16S539，CSF1PO，Penta D，D21S11，D5S818，D18S51，D19S433，D6S1043，TH01，F(xiàn)GA，D2S1338，D12S391，vWA，D8S1179，TPOX，Penta E，D2S441

服務(wù)流程 

收集細(xì)胞、樣本寄送、DNA提取、多重?zé)晒釶CR、毛細(xì)管電泳檢測、GeneMapper數(shù)據(jù)分析、數(shù)據(jù)庫比對 

樣本要求 

（1）活細(xì)胞： 細(xì)胞數(shù)≥10^6 cells T25瓶灌滿，常溫運(yùn)輸 

（2）細(xì)胞沉淀： 細(xì)胞數(shù)≥10^6 cells 離心后去上清，2~8℃運(yùn)輸

（3）凍存細(xì)胞： 細(xì)胞數(shù)≥10^6 cells， 干冰運(yùn)輸 

（4）DNA樣本： OD260/OD280 = 1.8-2.0，DNA濃度≥50ng/uL，DNA體積≥20uL，干冰運(yùn)輸 

結(jié)果提供 

STR 分型圖譜和檢測結(jié)果的書面報告。

案例展示

SY5Y 細(xì)胞STR鑒定結(jié)果的圖譜。

SY5Y：該株細(xì)胞DNA分型在細(xì)胞系檢索中找到匹配的細(xì)胞系，檢測到與數(shù)據(jù)庫中的SY5Y細(xì)胞匹配度達(dá)100%。本次檢測在該細(xì)胞系中未發(fā)現(xiàn)多等位基因。